血清作為細胞常用的天然培養(yǎng)基被廣泛的應(yīng)用于細胞培養(yǎng)中,因此血清的好壞直接影響到細胞的優(yōu)劣,今天就給大家介紹下如果選擇一款適合自己的血清。 今天主要介紹的是牛血清。牛血清可分為培養(yǎng)較難養(yǎng)的細胞和干細胞,而新生牛血清通常適用于比較好養(yǎng)的細胞,特別用于病毒疫苗的工業(yè)生產(chǎn)以及廣泛的科研領(lǐng)域。新冠影響下疫苗生成用到的新生牛血清激增,選對培養(yǎng)的血清非常重要。
在實際應(yīng)用中,常需要確定牛血清的濃度。常用濃度為5%~20%,也有用更低濃度的牛血清,這主要依賴于所用的人工合成培養(yǎng)基的類型、組成和營養(yǎng)程度。如果合成培養(yǎng)基的營養(yǎng)較豐富,那么可適當降低牛血清的濃度。它也依賴于所培養(yǎng)的細胞類型和培養(yǎng)的目的。下面以水牛卵母細胞為例。
在2008年,廣西大學(xué)等單位曾報道了不同濃度牛血清和白蛋白對水牛卵母細胞體外成熟的影響。卵母細胞的體外成熟是胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
研究人員將經(jīng)卵母細胞清洗2--3遍后,放入預(yù)先平衡過的不同濃度的牛血清(ECS,F(xiàn)CS,注:ECS為發(fā)情牛血清)及牛血清白蛋白(BSA)的成熟培養(yǎng)液中,其中對照組采用基礎(chǔ)培養(yǎng)液;并放入39℃、含5%CO及飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。基礎(chǔ)培養(yǎng)液為TCM199中加入一定量的激素(LH,F(xiàn)SH,雌二醇)。培養(yǎng)方式為微滴培養(yǎng)法,在60mm培養(yǎng)皿中作12~16個滴,每滴放30--40枚卵丘一卵母細胞復(fù)合體,并在培養(yǎng)液滴上面覆蓋石蠟油。
研究人員觀察了在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加不同牛血清及其濃度分別0(對照),10%ECS,20%ECS,10%FCS,20%FCS對水牛卵母細胞體外成熟的影響。結(jié)果顯示:10%ECS,20%ECS,10%FCS組的細胞成熟度顯著高于對照組,又以10%ECS組為突出。隨著FCS血清濃度的增加,成熟度逐漸提高,但無顯著差異。作者認為,添加血清是必要的,但不需太高的濃度。