U266B1人外周淋巴細胞
培養(yǎng)條件:89%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗
凍存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液
細胞質(zhì)檢情況:不含細菌、真菌、支原體等微生物污染
傳代建議:1:2~1:3傳代,2~3天換液1次
特別提醒:簽收細胞后,如細胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問題,煩請當天盡快聯(lián)系,以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù),請務(wù)必重視。
懸浮細胞接收后的操作流程與注意事項
1.如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室
2.擰松瓶蓋,細胞瓶豎立培養(yǎng)8h(或過夜)
3.待細胞沉底后吸除上層液體(含碎片殘渣,請小心操作),然后吸取沉底的細胞層(2ML左右轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶,加入新鮮的*培養(yǎng)基(如細胞狀態(tài)較差可將血清濃度調(diào)高到15%)繼續(xù)培養(yǎng)
U266B1人外周淋巴細胞
細胞處理方法:
一、貼壁細胞
1、 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基,到50ml離心管中,剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代,如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細胞,對50ml上清進行離心收集細胞,如果細胞連片狀態(tài),棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化(1ml胰酶37度),接種培養(yǎng)。
二、懸浮細胞
1、接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張)。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5、1000rpm,5min 離心,用吸管小心吸出上清,加入培養(yǎng)基,重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種,加入新鮮培養(yǎng)基,置于 37℃,5%CO2 培養(yǎng)(大部分細胞)。