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U87MG 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(tái)(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。
2、細(xì)胞操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。
3、小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
3、工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
| 目錄號(hào) | CC-Y1528 |
| 細(xì)胞英文(簡(jiǎn)稱) | U-87MG(U87MG) |
| 細(xì)胞名稱 | U-87MG(U87MG)人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 |
| 背景資料 | 收到細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快和我們聯(lián)系。如包裝完好，取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,拆下封口膜,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，細(xì)胞的貼壁情況以及細(xì)胞密度,然后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí)，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。 |
| 細(xì)胞來源 | ATCC |
| 代次 | P3 |
| 規(guī)格 | T25 |
| 細(xì)胞數(shù) | 50-100萬 |
| 價(jià)格 | 電議 |
| 生物安全級(jí)別 | 2 |
| 組織來源 | 腦膠質(zhì) |
| 細(xì)胞形態(tài) | 貼壁 |
| 細(xì)胞活力 | 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion) |
| 細(xì)胞檢測(cè) | 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌 |
| 培養(yǎng)條件 | RPMI-1640 +10% FBS;37℃，5% CO2 |
| 傳代方法 | 建議1:2-1:3 兩天換液一次 |
| 凍存條件 | *培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO |
U87MG 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
細(xì)胞處理方法：
一、貼壁細(xì)胞
1、 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時(shí)。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代，如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞，對(duì)50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞，如果細(xì)胞連片狀態(tài)，棄掉上清對(duì)收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。
二、懸浮細(xì)胞
1、接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。
3、嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。
5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞。
6、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細(xì)胞）。
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